雍正只有一个正式皇后，姓乌喇那拉氏，是内大臣费扬古的女儿。
这位皇后少年时代即入宫侍奉，当时康熙帝很喜爱她，作主将她许配皇四子，为雍亲王的正室嫡福晋。雍正元年被册为皇后时已届中年了。雍正帝同她相亲相爱，可惜她死于雍正九年九月。死的那一天，雍正帝异常伤心，他自己大病刚好，想亲自去为皇后合棺送行，大臣们竭力劝阻才作罢。于是下谕旨道：“皇后自重髫之年即侍奉皇父，与朕结合，四十多年孝顺恭谨始终如一。我因患病多时好容易痊愈，若亲临丧事，恐怕会触景生情过度悲伤，致使旧病复发。我未尽到夫妇间的礼数，心中很是难受，但大臣们劝我说，明代也没有皇后丧礼皇帝非亲自莫祭不可的规定，因此，我今特今皇子们朝夕奠祭。”言语中流露出莫大的哀痛。
乌喇那拉皇后谥号“孝敬”，与雍正帝合葬泰陵。继承皇位的皇四子弘历(乾隆帝)，是雍正帝的熹贵妃钮祜禄氏生的。熹贵妃在乾隆朝被尊为皇太后，于乾隆四十二年才死，死后被谥为皇后。