2003年，还在杭州艺校上学的叶祖新被选中出演《情断上海滩》而进入演艺圈。
2005年，参演古装电视剧《李小环与苗翠花》，饰演方世玉;同年，参演古装宫斗电视剧《大清后宫》，饰演少年道光帝。
2006年参演家庭伦理电视剧《死去活来》，饰演樊涛;参演古装历史电视剧《皇上二大爷》，饰演赵金山。
2008年，参演战争历史电视剧《父亲的战争》，饰演彭龙。
2009年，参演古装历史电视剧《杨贵妃秘史》，饰演韦坚;同年参演家族斗争电视剧《大管家》，饰演李复修;参演战争历史电视剧《内线》，饰演苏子童。
2010年，参演古装历史电视剧《大唐女巡按》，饰演欧阳;参演古装神话电视剧《活佛济公2》，分饰必清、瘦仙童两角;参演寻亲电视剧《杜鹃的女儿》，饰演小吴。
2011年，参演穿越电视剧《步步惊心》，饰演十爷;参演古装搞笑电视剧《怪侠欧阳德》，饰演淳贝勒。
2012年，参演爱情励志电视剧《错点鸳鸯》，饰演冷刚;参演传奇抗战题材电视剧《五台山抗日传奇之女尼排》，饰演任松良;参演古装历史电视剧《薛平贵与王宝钏》，饰演叶公公;参演战争历史电视剧《向着胜利前进》，饰演何医生;参演古装武侠电视剧《新白发魔女传》，饰演辛龙子;在古装历史传奇电视剧《隋唐英雄》中饰演裴元庆。
2014年，参演古装神话电视剧《欢天喜地俏冤家》，饰演高富帅;参演都市爱情电视剧《步步惊情》，饰演JACK;参演古装搞笑爱情电视剧《犀利仁师》，饰演范大同;参演都市爱情电视剧《说好的幸福》，饰演许诺;参演古装历史传奇电视剧《隋唐英雄3》，饰演薛丁山。
2015年，1月参演《蜀山战纪之剑侠传奇》，饰演医术不凡的张馅饼 ;8月参演的抗日电视剧《铁在烧》在浙江、安徽卫视播出，饰演走上歧路悲剧收场的丁丑娃 ;9月主演的爱情喜剧电影《穷途》上映，饰演前往苗寨寻找药方的男主角邹孝宇 ;参演都市情感电视剧《爱情万万岁》，饰演为爱痴狂的90后新新人类金波 ;11月参演庄园爱情电视剧《我们的秘密》，饰演为情所苦的造型师罗仁 ;11月与黄世超、杨世瀚、张思帆共同演唱的电视剧《蜀山战纪》片尾曲《我就是我》单曲发布 。12月主演民国动作悬疑电视剧《左眼诡事》，饰演左眼能看到鬼魂的男主角尹明涯。
2016年，8月参演都市剧《一粒红尘》，饰演痴情的酒吧老板闵朗。
2013年11月11日，叶祖新和蒋欣在微博互动正式公布恋情。2015年3月12日，宣布和平分手。
参演电视剧
一粒红尘2017饰演闵朗 导演宋洋 主演吴奇隆, 颖儿, 米露
蜀山战纪之剑侠传奇2016-01-16饰演张馅饼 导演黄伟杰 主演赵丽颖, 陈伟霆, 吴奇隆
我们的秘密2016饰演罗仁 导演林添一 主演韩栋, 蒋梦婕, 吕颂贤
左眼诡事2016饰演尹明涯 导演聂军 主演王秋紫, 张璇, 康磊
爱情万万岁2015-12-18饰演金波 导演刘新 主演刘涛, 黄觉, 张凯丽
铁在烧2015-08-25饰演丁丑娃 导演刘新 主演王雷, 刘涛, 齐奎
说好的幸福2015饰演许诺 导演阮志强 主演蒋梦婕, 朱佳煜
美人制造2014-09-07饰演袁客师 导演李慧珠 主演金世佳, 杨蓉, 张哲翰
欢天喜地俏冤家2014-07-22饰演高福帅 导演刘逢声 主演李易峰, 颖儿
犀利仁师2014-06-04饰演范大同 导演黄伟杰 主演吴奇隆, 刘诗诗, 吴映洁
步步惊情2014-04-22饰演JACK 导演李国立 主演吴奇隆, 刘诗诗, 孙艺洲
隋唐英雄42014-03-23饰演薛丁山 导演李翰韬 主演孙耀琦, 张卫健, 黄海冰
错点鸳鸯2014-02-20饰演冷刚 导演谭锐铭 主演赵丽颖, 戚迹, 韩栋
隋唐英雄32014-01-28饰演薛丁山 导演李翰韬 主演郑国霖, 张卫健, 刘晓庆
向着胜利前进2013-09-17饰演何医生 导演林建中 主演吴奇隆, 甘婷婷, 王新
五台山抗日传奇之女尼排2013-01-24饰演任松良 导演李翰韬 主演张卫健, 李彩桦
隋唐英雄2012-12-03饰演裴元庆 导演李翰韬 主演蒲巴甲, 张睿, 张瑞希
新白发魔女传2012-09-14饰演辛龙子 导演黄伟杰 主演吴奇隆, 马苏
活佛济公32012-07-15饰演必清 导演林添一 主演陈浩民, 林子聪, 陈紫函
薛平贵与王宝钏2012-04-19饰演叶公公 导演林添一 主演陈浩民, 宣萱, 馨子
怪侠欧阳德2011-12-19饰演淳贝勒 导演林添一 主演小沈阳, 林江国, 李晟
步步惊心2011-09-10饰演十阿哥 导演李国立 主演刘诗诗, 吴奇隆, 郑嘉颖
活佛济公22011-07-27饰演必清 导演林添一 主演陈浩民, 林子聪, 林江国
大唐女巡按2011-07-07饰演欧阳 导演尤小刚 主演钟欣桐, 陈浩民, 姬晨牧
杜鹃的女儿2011-01-08饰演小吴 导演刘二威 主演宋佳, 李立
大管家2010-11-28饰演李复修 导演吴锦源 主演宁静, 关礼杰
内线2010-09-27饰演苏子童 导演陶玲玲 主演孙淳, 钟汉良, 孙菲菲
杨贵妃秘史2010-04-27饰演韦坚 导演尤小刚 主演殷桃, 黄秋生
父亲的战争2009-12-30饰演彭龙 导演马功伟 主演李雪健, 黄海波
李小环与苗翠花2008-02-12饰演方世玉 导演杨绍鸿 主演郭蔼明, 田海蓉, 罗家英
死去活来2007-11-07饰演樊涛 导演尤小刚 主演刘 蓓, 刘 蓓
大清后宫2006-07-10饰演少年道光 导演张轩南 主演黄维德, 胡静, 陈浩民
情断上海滩2005-12-01饰演孙伟 导演尤小刚 主演陈龙, 戴娇倩, 刘冠翔
皇上二大爷2006-00-00饰演赵金山 导演刘仕裕 主演王 刚, 李修贤, 陈 好
白色情人梦2005-00-00饰演谢秘书 导演尤小刚 主演汤镇宗, 张晨光, 邬倩倩
参演电影
穷途2015-09-03饰演邹孝宇 导演刘彬杰 主演白凯南, 雪村, 念贤儿
汉太尉杨震2007饰演安帝 导演杨小波 主演海波
吝啬男友2007饰演白桦 导演杨小波 主演陈大伟
参演舞台剧
2002-06 玉鸟
2006 EMF
综艺节目
2016-06-05 来吧冠军 足球专场
2016-05-22 拜托拿稳 ----
2015-12-27 《星星的密室第二季》 第二季总决赛
2015-09-16 《全能极限王》 ----
2015-09-13 《星星的密室第二季》 ----
2015-05-08 《奔跑吧兄弟》 ----
2015-01-04 《星星的密室》 终极大逃脱 叶祖新逆袭夺冠
2014-12-10 火线英雄第1季 ----
2014-11-02 星星的密室 张艺兴转危为安 罗希助叶祖新闯关
2014-10-26 《星星的密室》 叶祖新_乔振宇秀高智商
2014-06-15 今晚80后脱口秀 ----
2014-05-31 春妮的周末时光 ----
2014-05-07 超级访问 ----
2014-05-06 鲁豫有约 ----
2014-05-03 年代秀 ----
2014-05-02 嗨2014 ----
2014-04-26 全民大猜想第2季 ----
2014-04-24 我爱记歌词 ----
2014-04-16 爽食行天下 ----
2014-02-01 快乐大本营 隋唐英雄齐欢聚
2013-05-18 男左女右 ----
2012-10-21 大牌生日会 ----
2012-09-01 快乐大本营 步步惊心专场
2013年3月，叶祖新参加家乡衢州认领“微心愿”行动，帮助一些困难人员达成心愿。叶祖新嘱托相关工作人员为衢州花园街道花园社区的4个困难家庭送上礼物，完成他们的心愿。2014年8月，叶祖新参与由韩红发起的“韩红爱心-百人援青” 大型公益医疗救助行动。
2015年8月，叶祖新参加“韩红爱心百人援贵”大型医疗援助公益行动，到贵州省罗甸县边阳镇担任志愿者。
影视类
▪ 2013 风尚权力榜颁奖典礼 年度飞跃新人奖 (获奖)
▪ 2011 影视新势力盛典 影视新势力奖 (获奖)
▪ 2011 乐视影视盛典 最期待古装电视剧奖 步步惊心 (获奖)
叶祖新，时而搞怪卖萌，时而深情凝望，诙谐的动作与明朗的笑容相得益彰，尽展其帅气的多面性。(中国日报网评价)叶祖新在《隋唐英雄》中所诠释的薛丁山，别与以往的角色，帅气的英姿驾驭于骏马之上，饱含深情的双眸让人感慨。(新民网评价)叶祖新凭借自身细腻的演技将《铁在烧》中的丁丑娃诠释的有血有肉，爱恨鲜活。(网易娱评)戏外的他孝顺父母又很体贴照顾别人，被赞是暖男。(新华网、搜狐娱评)
